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    普朗醫(yī)療器械公司1月20訊 利用尿液分析儀檢測(cè)尿液中形成分檢查是作為完整尿液分析不可缺少的重要組成部分，同時(shí)這種檢測(cè)對(duì)泌尿系統(tǒng)等疾病的診斷、定位、鑒別、預(yù)后判斷、藥物治療監(jiān)測(cè)及健康人員篩查等有重要意義。

        在尿液形成過(guò)程中，由于泌尿道組織的脫落物及細(xì)胞滲出通過(guò)尿離體后自行沉降或通過(guò)離心技術(shù)。后者的敏感性和陽(yáng)性率較未離心沉降法高15～20倍，因此是目前尿沉渣鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ)。用離心法檢查尿沉渣的操作要求必須標(biāo)準(zhǔn)化，如離心機(jī)內(nèi)溫度應(yīng)保持15C～25C，離心條件如相對(duì)離心力（RCF）400G離心5 min等，使用普通亮視野光學(xué)顯微鏡，鏡頭（目鏡、物鏡）應(yīng)固定，低倍高倍看1520個(gè)視野。采用干涉、相差、偏光熒光、掃描和透視電鏡等多種顯微鏡檢查，顯著地提高了對(duì)各種尿有形成分中“顆粒”的識(shí)別和檢出。采用高質(zhì)量光學(xué)玻璃制成的尿沉渣分析板，可保證每份尿標(biāo)本在同等體積、相同厚薄區(qū)域內(nèi)的分析結(jié)果，配合自動(dòng)混勻、自動(dòng)吸引、自動(dòng)稀釋、自動(dòng)清洗等功能，以達(dá)到保證尿沉渣檢查結(jié)果精密和準(zhǔn)確。近年來(lái)Kouri提出尿顆粒分析的概念：即尿中的 各種細(xì)胞、管型、結(jié)晶、精子、細(xì)菌（霉菌）均屬顆粒，如能采用不稀釋的新鮮尿，用自動(dòng)化儀器識(shí)別及定量是改變傳統(tǒng)離心手工操作，滿足病人、健康人尿檢查需要的前沿性的實(shí)驗(yàn)方法改革。由于傳統(tǒng)的尿沉渣在普通亮視野的玻片上對(duì)濕片直接觀察受涂片厚薄、觀察有效分布區(qū)、顯微鏡放大倍數(shù)、光亮調(diào)節(jié)等多種因素以及檢查者的經(jīng)驗(yàn)水平等多因素影響鏡檢結(jié)果造成對(duì)尿有形成分檢出的差異與不可比性，Haber提出如在尿中查不出有病理意義的成分，鏡檢就缺乏臨床價(jià)值；要進(jìn)行認(rèn)真、細(xì)微有對(duì)比性的檢查就應(yīng)強(qiáng)調(diào)染色后細(xì)微檢查的重要性。

1 尿有形成分染色的作用

1.1 防止漏檢   如透明管型在強(qiáng)的光線下易漏檢，即使采用調(diào)節(jié)聚光鏡減弱光線，對(duì)缺乏經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)人員也極易漏檢。
 1.2 防止誤檢   如將粘液絲或棉、毛等纖維誤認(rèn)為管型，將酵母菌、草酸鈣誤認(rèn)為是紅細(xì)胞、將腎小管上皮細(xì)胞誤認(rèn)為是白細(xì)胞等。
 1.3 防止因長(zhǎng)期鏡檢造成的疲勞、工作效率下降   染色后，可在短期內(nèi)清楚地觀察有形成分的細(xì)微結(jié)構(gòu)，有助于識(shí)別腫瘤細(xì)胞和腎移植排斥反應(yīng)。
 1.4 為長(zhǎng)期保存尿中典型的病理成分，為提供教學(xué)、科研的圖譜創(chuàng)造條件。   盡管通過(guò)對(duì)尿有形成分染色有防止漏檢，提高對(duì)病理成分鑒別力等優(yōu)點(diǎn)，但我們也應(yīng)充分認(rèn)識(shí)到尿中有形成分存在 著多樣性、復(fù)雜性及易變性等問(wèn)題；即使是用于化學(xué)試帶聯(lián)合普通亮視野顯微鏡聯(lián)合檢查也存在一定的局限性，有待進(jìn)一步改革提高。

2 尿有形成分染色方法及其選擇

    國(guó)內(nèi)外有的作者不提倡沉渣染色檢查?；蛱岢鰧⑷旧鳛樘厥鈾z查與“常規(guī)”沉渣檢查分列；染色方法少則2種，多的可達(dá)10多種。為便于敘述，現(xiàn)將染色法歸納為單染、復(fù)合染色、活體染色、鑒別染色及特殊染色等五種。

2.1 單染法  即單一染色液染尿中有形成分的方法，如在濕的尿沉渣片（簡(jiǎn)稱濕片）中加入2%醋酸1滴可破壞紅細(xì)胞，鑒別酵母菌孢子外，還可清楚見(jiàn)到白細(xì)胞核。濕片中加一滴Lugor碘液，上皮細(xì)胞染淡黃而白細(xì)胞深染，管型也著色。以藍(lán)色染料有0.5%～ 1%亞甲藍(lán)、2%考馬斯亮藍(lán)、品藍(lán)等，我們感到藍(lán)染料單一而后者細(xì)胞不易著色，但粘液絲藍(lán)色可辨。歐洲尿液檢查文件推薦應(yīng)用0.5%甲苯胺藍(lán)認(rèn)為有對(duì)胞核結(jié)構(gòu)染色清晰的優(yōu)點(diǎn)，崔建和用2%孔雀綠觀察了36例小兒急性腎炎發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞管型清晰。其他的單染值得注意的是膽汁，因在嚴(yán)重肝病黃疸尿中，尿中各種染色結(jié)構(gòu)分明易于識(shí)別，因而沒(méi)想用天然的膽汁染“濕片”是否可取？

    以上列舉的幾種單染法有試劑單純、易得、低廉且易于配制，染色簡(jiǎn)便、易于推廣等優(yōu)點(diǎn)，但缺點(diǎn)為染色單一，對(duì)核、胞質(zhì)不易鑒別，分色及滲透性差，高濃度染料放置后形成沉渣，因此最好用小包裝，分裝染色前濾過(guò)殘?jiān)悦飧蓴_染色視野。

2.2 復(fù)合染色   用兩種或兩種以上染色法或加助染劑的染色法。最常用的尿沉渣在玻片干燥后（簡(jiǎn)稱干片）使用瑞-吉氏聯(lián)合染色，由于與血片染色同步，各實(shí)驗(yàn)室易于實(shí)施及推廣。北醫(yī)大一院1987年用本法計(jì)數(shù)尿沉渣中性粒細(xì)胞的百分比以70%為界區(qū)別感染及非感染。但干片需時(shí)長(zhǎng)，干燥片時(shí)細(xì)胞易變性及形態(tài)變化，與濕片比較細(xì)胞、管型易溶解和變形；在有形成分少的干片上如不加血清固定，則易因沖洗不易看到其中有形成分。瑞氏染色還受pH值、溫度等因素影響，不易看清腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)。據(jù)多種文獻(xiàn)介紹，認(rèn)為巴氏（Papanicolaou）染色為最佳復(fù)合染色法，不僅分色良好，有形成分結(jié)構(gòu)清晰，且對(duì)尿中異形細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞易于分辨；Schumann在腎細(xì)胞病理染色為首選方法，但因染料品質(zhì)要求高，采用多種染料、多次脫水手續(xù)繁雜，因而很難普及。

2.3 活體染色法   簡(jiǎn)便易行的有1%燦爛甲酚藍(lán)（煌焦油藍(lán)）易在各單位實(shí)施，但也具備上述單染法的問(wèn)題。Sternheimen-Malbin(S-M)即龍膽紫-沙黃染色染料價(jià)廉易得，染色方便，已成為國(guó)內(nèi)外介紹最多的染色方法。早在60年代的專著中對(duì)染料配制染色方法已有詳細(xì)介紹，通過(guò)S-M染色紅細(xì)胞可染成淡藍(lán)色，多形核白細(xì)胞染成橙紅色，在有的白細(xì)胞胞質(zhì)中見(jiàn)顆粒呈Brown分子運(yùn)動(dòng)定名為閃光細(xì)胞。據(jù)報(bào)道如在白細(xì)胞中＞10%，對(duì)確定腎盂腎炎有助。透明管型呈粉紅或淡紫色細(xì)胞管型染成深紫色，但本法試劑配制后易產(chǎn)生沉渣，且對(duì)尿有形成分鑒別作用不夠強(qiáng)，因而歐洲文件建議用Alicianblue 8G-Pyronin B組合即Sternbeimer(S)染色法取代，國(guó)內(nèi)也有SM染色及S染色法染色結(jié)果對(duì)比表的介紹。其他復(fù)合染色如Kage 染色法，采用醋酸酮、8-羥喹啉聯(lián)苯胺組合鑒別白細(xì)胞，但后者為致癌物，不再推薦。還有Lippman染色法用飽和苦味酸、甘油、美藍(lán)、伊紅等染料，但染料組合后易產(chǎn)生紫褐色細(xì)顆粒干擾染色。

2.4 鑒別染色   按不同染色法以鑒別尿中不同成分，如用油紅-O或蘇丹-Ⅲ染脂肪，Hansel染色染嗜酸粒細(xì)胞脂酶，Naphy-ASD染色查單核細(xì)胞，Gram染色法染細(xì)菌，普魯士藍(lán)染含鐵血黃素等，這些染色在國(guó)外已列入規(guī)程要求達(dá)到規(guī)范化、程序化及標(biāo)準(zhǔn)化，在尿有形成分染色中發(fā)揮鑒別作用，因此在國(guó)內(nèi)建議借鑒應(yīng)用在實(shí)驗(yàn)檢查中有利于對(duì)尿顆粒的識(shí)別。

2.5 特殊染色法   為近年來(lái)在自動(dòng)尿有形成分檢查推廣的染色法，土在自動(dòng)尿有形成分細(xì)胞儀（UF-100、UF-50）應(yīng)用的快速的尿顆粒成分檢查。UF系列將染料Uninosearch即含2種類型的熒光染料：羰化青及菲啶使尿顆粒著色后，經(jīng)激光照射，檢測(cè)著色顆粒前向散射光和不同熒光強(qiáng)度，提供尿中顆粒大小及染色敏感性的信息。本法有不需離心，方法統(tǒng)一可比性高，易進(jìn)行質(zhì)量管理可同時(shí)完成紅細(xì)胞、白細(xì)胞、細(xì)菌（酵母菌）等多項(xiàng)檢測(cè)，因而是尿分析的重大改革。采用熒光染料在熒光顯微鏡下觀察腫瘤細(xì)胞，用掃描、透射電鏡觀察細(xì)菌管型。另外采用免疫組化染色識(shí)別管型來(lái)源，便于對(duì)急性腎小管壞死，急性間質(zhì)性腎炎，新月型腎炎特殊腎疾病提供了無(wú)需活檢的鑒別實(shí)驗(yàn)，本法實(shí)驗(yàn)需針對(duì)腎細(xì)胞、管型的各種單克隆抗體，實(shí)驗(yàn)難度大，因而報(bào)道不多。

    Grupp C等報(bào)道在丙酮固定后鑒別非鱗狀上皮核的凝集素染色法即通過(guò)免疫熒光檢查提供了一種鑒別尿中有核細(xì)胞的可靠方法，Grunewald-R-W等觀察了41例腎移植排斥反應(yīng)病人，用流式細(xì)胞儀觀察尿中淋巴細(xì)胞CD3、CD4、CD8、CD14及單核巨噬細(xì)胞，提供了一個(gè)對(duì)急性腎排斥反應(yīng)有參考價(jià)值的尿有形成分染色法。
    
     尿有形成分雖有一定進(jìn)展，我們初步介紹了各種鑒別尿中顆粒的染色法，特別是自動(dòng)分析儀--流式細(xì)胞儀，半自動(dòng)定量分析板等均采用染色技術(shù)提高鑒別力證明了染色的重要性。通過(guò)上述方法介紹及選擇原則，各種染色法各有特點(diǎn)。在基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用復(fù)合染色或活性染色比單染效果好，腎科用免疫熒光提高識(shí)別力，而鑒別染色有助于對(duì)尿中 不同顆粒的識(shí)別。如何進(jìn)一步完善染色法對(duì)染液進(jìn)行質(zhì)量管理，并對(duì)染色方法規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，是今后值得深入探討的。還有一個(gè)重要的問(wèn)題是如何將尿有形成分染色法用于腎、泌尿道及其他疾病病人的防治工作，加強(qiáng)臨床及實(shí)驗(yàn)室的聯(lián)系，為臨床服務(wù)，也是實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)經(jīng)常考慮到的。