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生化分析儀常用的三種方法類型
生化分析儀常用的三種方法類型
加入時間：2012-01-31 11:19:19 當前新聞點擊率：6295
生化分析儀方法類型常用的方法有終點法、連續(xù)監(jiān)測法、比濁法等，根據(jù)被檢物質(zhì)的檢測原理等選擇其中一種分析方法。 一、終點法又稱為平衡法，是基于反應達到平衡時反應產(chǎn)物的吸收光譜特征及其對光吸收強度的大小對物質(zhì)進行定量分析的一類方法，有一點終點法和兩點終點法兩類。一點終點法的特點是使用一種或兩種試劑，當待測物與試劑反應達到終點時，測定混合溶液的吸光度來計算待測物的濃度，該法常用的有總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法、葡萄糖氧化酶法等，手工操作的大多數(shù)方法都是一點終點法。兩點終點法也稱固定時間法，如果是單試劑分析，當測定波長同干擾物質(zhì)的吸收光譜有重疊時，通過選用兩點終點法可消除樣品空白引起的干擾，其分析過程是在樣品與試劑混合后經(jīng)過一段延滯期讀取一個點A1，一定時間后再讀取A2，然后比較標準和測定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待測物的濃度。肌酐苦味酸法就是一個典型的單試劑兩點法的例子。如果是雙試劑分析，選用二點終點分析法除了可消除樣品空白引起的干擾外，還可消除內(nèi)源性干擾物質(zhì)的干擾，其分析過程是加入試劑1后讀取A1，加入試劑2后讀取A2，A1相當于讀出樣品空白值，A2才是實際呈色反應，然后比較標準和測定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待測物的濃度。為了提高終點法檢測的準確性，選擇該法時應設置終點法零點讀數(shù)、樣品空白等兩個分析參數(shù)，前者是在反應前即開始讀數(shù)，可以扣除反應前試劑和樣品混合液的空白讀數(shù)；后者是樣品加空白試劑所得到的吸光度，反應需要占用一個比色杯。 二、連續(xù)監(jiān)測法又稱動態(tài)分析法、速率法等，基本原理是在酶促反應的最適條件下，用物理、化學或酶促反應的分析方法，在反應速度恒定期（零級反應期）內(nèi)連續(xù)觀察和記錄一定反應時間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化，以單位時間酶反應初速度計算出酶活力的大小和代謝物的濃度。具體方法有兩點速率法和多點速率法：兩點速率法是通過觀察在零級反應期內(nèi)兩個時間點的吸光度，用兩個點的吸光度的差值（ΔA）除以時間（分），計算出每分鐘的吸光度變化值；多點速率法是在零級反應期內(nèi)每隔一定時間（2-30s）進行一次監(jiān)測，連續(xù)監(jiān)測多次，求出單位時間內(nèi)的反應速度，這種方法又可分為最小二乘法、多點δ法、回歸法、帶速率時間法等。該法具有明顯的優(yōu)點就是大大提高了分析速度和準確性，主要適用于酶活性及其代謝產(chǎn)物的測定。在連續(xù)監(jiān)測法過程中，即使不加樣品，試劑中的底物也會自動降解得到一個結(jié)果，因此應設置試劑空白速率，不同批號試劑的試劑空白速率不一樣，其值為以水代樣品測得的項目結(jié)果，樣品測定結(jié)果應扣除試劑空白速率的數(shù)值。 三、比濁法自動生化分析儀一般只能做透射免疫比濁分析，當光線通過一定體積的含免疫復合物的溶液時，由于溶液中存在的抗原-抗體復合物粒子對光線的反射和吸收，引起透射光的減少，測定的光通量和抗原抗體復合物的量成反比。它常用于終點法測定，目前主要用于血清特種蛋白的檢測，如載脂蛋白、微量蛋白、急性時相反應蛋白、免疫球蛋白以及某些藥物監(jiān)測等。但是如果樣品中待測抗原濃度過高，抗原與抗體形成的免疫復合物分子將會變小，而且易發(fā)生解離，使?jié)岫确炊陆担虼嗣庖弑葷岱治鲞^程中必須設置前區(qū)檢查，比較分析過程中后兩個讀數(shù)點的差別，如果后一點比前一點的吸光度低，則表示抗原已過剩，應將樣品稀釋后重測。 本文由普朗醫(yī)療器械網(wǎng)編整理發(fā)表！轉(zhuǎn)載時請注明來源—http://m.kansascitysteals.com/
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